- 標記二抗的選擇及應用實例
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- 標記二抗的作用
二抗是在其它宿主體內制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體，上面通常連有酶或熒光素等標簽。由于標記二抗所具備的優點使得其在免疫學實驗中得以應用廣泛，如western blot(通過與特異性抗體結合來鑒定蛋白質)，ELISA，免疫組織化學(檢測組織中的特異性抗原)，免疫細胞化學(通過免疫學方法檢測細胞的抗原組成)，流式細胞術及免疫沉淀(通過抗原與抗體的特異性結合作用來分離相應抗原)。
二抗針對某一特定物種(如小鼠)的所有抗體均具有特異性，因而使用標記二抗可以免去對每一個一抗進行標記，大大節省了時間和費用;此外，一個一抗分子可以同時結合幾個二抗分子，從而使信號大大增強，提高了實驗靈敏度。
標記二抗可以耦聯有幾種不同的標記，可以是酶，熒光素，或生物素。
標記二抗的選擇
通常情況下，某一特定的實驗中可能同時有幾種二抗可供選擇，如何能選擇到該實驗的二抗，需要綜合以下幾個方面進行考慮：
一抗的物種來源
一抗是在什么物種來源的，相應的二抗也要是抗該物種的抗體。例如，如果一抗是在小鼠體內制備的，那么你就應當選擇抗小鼠的二抗，如果一抗是在兔體內制備的，那么二抗就應當是抗兔的抗體。至于二抗本身是在什么動物中制備的對二抗的質量并無明顯的影響。
一抗是屬于哪個類或亞類
二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應的標記二抗就是抗IgG抗體。單克隆抗體的類別及亞類通常會在產品列表中列出，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相應的二抗就應當是抗小鼠IgM，或是抗小鼠IgG抗體。
如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3)，那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合，或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么二抗在雙標記實驗中尤其適合。
如果你不知道一抗是哪一類別或亞類，那么抗小鼠IgG是一個不錯的選擇，因為此種抗體可以識別大多數類型的IgG免疫球蛋白。
標記二抗應用實例分析
為分析標記二抗的使用情況，我們隨機抽取了100篇2007年或2008年發表于Science 或 Journal of Biological Chemistry雜志上的 文章(英文)，這些文章涵蓋了來自于16個國家的約80個研究機構。收集的數據顯示二抗的使用非常廣泛，可以應用到幾乎所有類型的免疫檢測中，尤其是Western blot、免疫組織化學和免疫細胞化學。事實上，二抗在ELISA及流式細胞術中應用也很廣泛，不僅用于科學研究，而且廣泛的應用于臨床分析和疾病診斷。比較而言，二抗在免疫沉淀中的應用相對較少。以下內容是基于對所收集的二抗信息進行統計分析后得出的一些結論，對于您在具體的實驗中如何選擇的抗體具有借鑒作用。
選擇二抗時，您必須考慮到以下因素，如一抗的物種、產生二抗的宿主、一抗的類別或亞類、二抗所耦聯的探針類型及二抗的形式(如整個IgG分子，F (ab’) 2片段，或Fab片段)等等。因此選擇哪種類型的二抗很大程度上決定于您所使用的一抗是什么，尤其針對種屬和類別而言。通常情況下，一抗可以在山羊、小鼠、兔子、大鼠及綿羊體內制備，其中屬小鼠及兔子zui為常見，相應的，標記二抗的種屬也應當與一抗的相一致。而對于制備二抗的宿主，則應選擇另外一種不同的動物，一般選用驢、山羊、兔子、綿羊或其他較大的動物，可以實現二抗的大規模制備，其中又屬山羊使用zui多。
對于二抗類別或亞類的選擇，應遵循與一抗類別或亞類相一致的原則，其中抗IgG使用zui多。這可能是因為除了五種類別的單克隆抗體外，很多一抗是多克隆抗體，屬于IgG類免疫球蛋白。此外anti-IgG可以識別幾乎所有類型的IgG亞類，因此，在不清楚一抗是屬于那個類別或亞類的時候，anti-IgG抗體是個不錯的選擇。從我們的數據來看，值得注意的是， IgG亞類特異性的二抗(如抗IgG1，抗IgG2，抗IgG2a，抗IgG2b)通常用于雙標記實驗中，包括免疫細胞化學、免疫組織化學及流式細胞術。
此外，整個IgG分子是zui常用的一種二抗分子形式，而F (ab’) 2片段或Fab片段一般僅用于特殊實驗中，如需要避免抗體與具有Fc受體的細胞結合的情況，或需要封閉內源性免疫球蛋白的時候。
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