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關(guān)于我們首頁 > 產(chǎn)品中心 > 細胞生物學 > 鈣離子熒光探針 > FS1222Fluo-8 AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針
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  • Fluo-8 AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針
  • 型號:FS1222
  • 報價:380
  • 地區(qū):上海市
  • 0
  • Fluo-8 AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針,F(xiàn)luo-8(Fluo-2 Medium Affinity),是目前最亮的可見光激發(fā)波長Ca2+熒光探針,其熒光強度比Fluo-4強兩倍,比Fluo-3強四倍。Fluo-8具中等程度的Ca2+親和力,幾乎接近Fluo-3,F(xiàn)luo-4(Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.
  • 021-34600120
產(chǎn)品詳細介紹

Fluo-8 AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針 

產(chǎn)品簡介

Fluo-8(Fluo-2 Medium Affinity),是目前最亮的可見光激發(fā)波長Ca2+熒光探針,其熒光強度比Fluo-4強兩倍,比Fluo-3強四倍。Fluo-8具中等程度的Ca2+親和力,幾乎接近Fluo-3,F(xiàn)luo-4(Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM),使用上幾乎同F(xiàn)luo-3和Fluo-4。Fluo-8不僅維持Fluo-3,F(xiàn)luo-4便捷的光譜檢測特性,與Ca2+結(jié)合后的最大激發(fā)波長為490nm,最大發(fā)射波長為514nm。而且具有改善的細胞載入和Ca2+響應(yīng)能力。Fluo-8加載具較弱的溫度依賴性,在室溫或37℃孵育皆染色良好,不像Fluo-3,F(xiàn)luo-4嚴格要求在37℃孵育,此特征使其更適用于HTS高通量篩選實驗。Fluo-8應(yīng)用廣泛,與許多細胞系和靶向樣本兼容,不會受配體或靶標本身信號干擾。

Fluo-8可通過激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀、熒光酶標儀、熒光顯微鏡等來檢測胞內(nèi)鈣離子水平的變化。Fluo-8, AM是Fluo-8的一種乙酰甲酯衍生物,具有細胞膜滲透性,只需簡單培養(yǎng),即可輕易進入細胞。一旦進入細胞內(nèi),即被其內(nèi)酯酶剪切生成不具膜滲透性的Fluo-8,從而滯留在胞內(nèi)以發(fā)揮相應(yīng)生理功能。

本品以50ug小包裝的凍干粉形式,用于細胞內(nèi)Ca2+水平檢測時,推薦濃度1-5uM。

Fluo-8 AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針 

基本特性

同義名:Fluo-8, AM

分子式:C50H50N2O23

分子量:1046.9316       

溶解性:溶于DMSO(1-5 mM)   

Ex/Em:490/514nm(Ca2+結(jié)合);

儲存條件:置于-20℃干燥保存,1年效期。

Fluo-8 AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針

使用方法

A 試劑準備

1)配制Pluronic F-127母液:稱取100mg Pluronic F-127粉末(貨號:Cat No. FS0432)中加入500ul DMSO,配制成20%(W/V)母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min.溶液室溫保存,不用冷藏。如有結(jié)晶析出,可以重新加熱溶解,不影響使用。

2)HHBS BUFFER(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer,pH7.3)或者其他生理緩沖液

B 操作步驟

1)用無水DMSO溶解Fluo-8,AM配制成1-5mM的儲存液,或?qū)⒁雅浜玫腇luo-8,AM儲存液取出于室溫回溫。(如:若配制成4mM的母液,需向50ugFluo-8,AM中加入11.9ul無水DMSO)。

2)用HHBS或其他生理緩沖液Fluo-8,AM+DMSO儲存液稀釋到1-10uM的工作液,提前加入適量的20%Pluronic F-127溶液,使其終濃度為0.02%。

【注(1)】:Fluo-8,AM應(yīng)用在大部分細胞的推薦加載濃度為4-5uM,具體的使用濃度需根據(jù)實驗要求進行優(yōu)化。為了避免過度加載造成細胞毒性,建議在取得結(jié)果的基礎(chǔ)上盡量使用zui低探針濃度。

【注(2)】:Fluo-8,AM工作液需現(xiàn)配使用,避免反復(fù)凍存。

【注(3)】:Pluronic F-127可以防止Fluo-8,AM在溶液中聚合并促使探針更好進入細胞。但Pluronic F-127可降低Fluo-8,AM的穩(wěn)定性,因此只建議在配制工作液時加入,不建議加入儲存液長期保存。

3)【可選】如果細胞內(nèi)含有機陰離子轉(zhuǎn)運體,丙磺su(Probenecid,1-2.5mM)或者,磺吡酮(Sulfinpyrazone,0.1-0.25mM)可能需要加入細胞培養(yǎng)基內(nèi),以降低去酯化探針的泄露。

【注(1)】:丙磺su或磺吡酮儲存液相當偏堿,因此加入培養(yǎng)基后需要重新調(diào)整pH。

4)將準備好的Fluo-8,AM工作液加入細胞,加入量以覆蓋細胞為準。37℃或者室溫孵育20-60min。

【注(1)】:關(guān)于孵育的時間,如果首ci做實驗不能確定,建議先孵育30min,看熒光效果;如果細胞死亡較多,適當縮短時間;如果熒光強度太弱,適當延長時間。

【注(2)】:降低探針加載溫度可能會降低探針的區(qū)室化現(xiàn)象。

5)吸掉染色工作液,并用HHBS或其他生理緩沖液(如有必要,使用含轉(zhuǎn)運體抑制劑如2.5mM丙磺酸的緩沖液)替換,去除多余探針。

6)用適當?shù)膬x器如激光共聚焦、流式細胞儀、熒光酶標儀等,用波長Ex/Em=490/520nm來進行檢測。

【注(1)】:Fluo-8,AM進入胞內(nèi)后,經(jīng)酯酶降解形成Fluo-8,并不是以供價結(jié)合的形式滯留在細胞質(zhì)內(nèi)。因此不可對加載染料的活細胞進行固定處理,再進去Ca2+水平檢測。

注意事項

1)熒光染料均勻在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

2)乙酰氧基甲酯(AM)易吸潮,冰箱取出后請在干燥的環(huán)境放至室溫后在開封。由于試劑微量,開封前請將其短暫離心,以保證粉末落入管底。

3)Fluo-8,AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管底、或管壁或管蓋內(nèi),可在20-25℃溫育片刻至全部溶解后使用。

4)Fluo-8,AM第一次使用,建議儲存液現(xiàn)配現(xiàn)用,分裝成單次用量,嚴格做到≤-20℃密封干燥凍存,以防止受潮。為了保證良好的實驗效果,盡量在短時間內(nèi)使用。

5)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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